方法简介

二硫键是通过蛋白质中两个半胱氨酸上的巯基氧化而形成的，是一种重要的蛋白质翻译后修饰。在非还原状态下，用IAA将蛋白质游离的Cys封闭，再分别用Trypsin、Chymotrypsin、Glu-C进行酶切，酶解产物通过质谱检测后进行分析，通过匹配所得到的MS/MS图谱，找出二硫键连接的肽段，确定二硫键的配对方式。

样品要求

关于样品：请确保蛋白浓度大于1mg/ml， 最小量不得低于50Pmol，蛋白纯度最好大于90%；含盐量：挥发性无机盐<20mM，不挥发性无机盐<5mM；蛋白溶液避免SDS等变性剂，表面活性剂，或其它保护剂，不含tris缓冲体系。

样品运输：请使用足量的干冰运输，并尽量选用较快的邮递方式，以降低运输过程中样品降解的可能性。

案例分析