方法简介
糖基化根据糖链在肽链上的连接位点分为N-糖基化和O-糖基化。N-糖链是糖链通过还原端的N-乙酰胺葡萄糖(GlcNAc)以β1,4键和蛋白质肽链中Asn的酰胺氮连接, O-糖链是糖链通过还原端的N-乙酰氨基半乳糖(GalNAc)以α1,4键和蛋白质肽链上Ser或Thr的氧原子(O)连接。最为常见的N-糖基化序列为经典三联子序列,Asn-X-Ser/Thr。 O-糖基化的糖链较短,但种类比N-糖基化更加复杂。N-糖链(由天冬酰胺连接寡糖)结构分析包括寡糖链释放、标记、液质联用分析和数据处理四个步骤。
样品要求
关于样品:至少需要20ug的蛋白质,纯度>90% ;含盐量:挥发性无机盐<20mM,不挥发性无机盐<5mM;蛋白溶液避免SDS等变性剂,表面活性剂,不含tris缓冲体系。
样品运输:请使用足量的干冰运输,并尽量选用较快的邮递方式,以降低运输过程中样品降解的可能性。
案例分析